Иммуноблот антинуклеарных антител при склеродермии

Обновлено: 05.05.2024

Специфичные аутоантитела к различным компонентам клеточного ядра, которые образуются при некоторых тяжелых аутоиммунных патологиях и имеют большое значение в диагностике системных ревматических заболеваний.

Для чего используется этот анализ?

Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани.

Когда назначается анализ?

При выявлении антинуклеарных антител, антинуклеарного фактора в крови.

Синонимы русские

Специфичные АНА, антитела к экстрагируемым ядерным (нуклеарным) антигенам.

Синонимы английские

Antinuclear Antibodies (ANA) Comprehensive Profile, ANA-specific Antibodies, Extractable Nuclear Antigen Antibodies (ENA Panel).

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Антинуклеарные антитела (АНА) к экстрагируемым ядерным антигенам представляют собой антитела к растворимым компонентам ядра клетки (рибонуклеопротеинам). В норме АНА отсутствуют в организме. При аутоиммунной патологии иммунная система начинает вырабатывать специфические иммуноглобулины к собственным клеткам и их компонентам.

Основной метод определения специфичности антител при положительном антинуклеарном факторе – это иммуноблотинг, позволяющий дифференцировать системные заболевания соединительной ткани. Данный метод исследования дает возможность одновременно выявить антитела к нескольким различным внутриклеточным антигенам, которые могут встречаться как сочетанно, так и изолированно.

Анти-Sm (Smith) – антитела к U1-, U2-, U4-рибонуклеопротеинам – специфичны для системной красной волчанки (СКВ). Они редко встречаются при других системных заболеваниях соединительной ткани и являются одним из критериев диагностики СКВ. При этом, однако, концентрация анти-Sm не коррелирует с активностью системной красной волчанки.

Антитела к антигенам RNP (anti-ribonucleoprotein) – это антитела к белковым компонентам малого ядерного нуклеотида – U-1-РНК. Они обнаруживаются при смешанных заболеваниях соединительной ткани (синдроме Шарпа), реже при системной красной волчанке и других ревматических заболеваниях.

Антитела к SS-A (Ro) направлены на белки, связанные с РНК Y1-Y5 в составе сплайсосомы. Эти антитела наиболее часто обнаруживаются при синдроме Шегрена и системной красной волчанке. При СКВ их продукция ассоциируется с определенным набором клинических проявлений и лабораторных нарушений: светочувствительностью, синдромом Шегрена, гиперпродукцией ревматоидного фактора. Присутствие анти-SS-A-антител в крови беременной женщины связано с высоким риском развития неонатального волчаночного синдрома у ребенка.

Анти-SS-B(La)-антитела к белку, связанному с РНК-полимеразой-3, выявляются при болезни Шегрена и в начальном периоде системной красной волчанки, развивающейся в пожилом возрасте и ассоциирующейся с низкой частотой развития нефрита.

Антитела к Scl-70 (антисклеродермальные антитела с молекулярной массой 70 кДа, антитела к топоизомеразе I) чаще появляются при диффузной (40 %), реже при ограниченной (20 %) форме системной склеродермии, CREST-синдроме. Они высокоспецифичны для склеродермии и являются плохим прогностическим признаком относительно развития легочного фиброза.

Антитела anti-PM/Scl – специфический серологический маркер для подгруппы больных склеродермией (Scl), полимиозитом (PM) и особенно для тех, у кого наблюдается совокупность симптомов обоих заболеваний (PM/Scl).

Антитела к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA) – один из высокоспецифичных тестов для выявления системной красной волчанки.

Антицентромерные антитела (анти-CENT-B) обнаруживаются у больных склеродермией, системной красной волчанкой и ревматоидным артритом. У больных системной склеродермией выявление данных антител указывает на благоприятный прогноз и низкую вероятность поражения внутренних органов.

Анти-Jo-1-антитела (антитела к гистидин-тРНК-синтетазе) впервые были обнаружены в сыворотке крови больных миозитом. У большинства больных с повышенным уровнем антисинтетазных антител выявляется интерстициальная болезнь легких, феномен Рейно. Данное исследование может быть использовано как прогностический маркер прогрессирования болезни.

Антитела к гистонам представляют собой одну из разновидностей антитуклеарных антител и определяются в основном при системной красной волчанке, являясь ее ранними маркерами.

Антитела к нуклеосомам – чувствительный маркер системной красной волчанки. Они определяются исключительно при СКВ, нередко осложненной поражением почек (люпус-нефритом).

АТ к рибосомальному белку Р (Ribo P) встречаются у 10-20 % больных с СКВ. Они взаимодействуют с фосфоропротеинами рибосом и встречаются преимущественно у больных СКВ с поражением центральной нервной системы, почек и печени. Их обнаружение специфично для СКВ, протекающей с волчаночным психозом.

Анти-AMA-M2 – антитела к антигенам митохондрий М-2, расположенным на внутренней мембране органеллы в виде комплекса ферментов. Данные антитела синтезируются при первичном билиарном циррозе и указывают на его тяжелое течение.

Некоторые разновидности АНА встречаются при одном заболевании или при перекрестных синдромах. Например, антитела к SS-A и SS-B или к RNP и Sm-антигенам часто выявляются совместно, поскольку входят в один белковый комплекс, выступающий антигеном для данных типов аутоантител.

Для чего используется исследование?

Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани;
для мониторинга течения и оценки прогрессирования ревматических заболеваний;
для дифференциальной диагностики некоторых аутоиммунных заболеваний.

Когда назначается исследование?

При выявлении антинуклеарного фактора и антинуклеарных антител в крови;
при симптомах аутоиммунных заболеваний (длительное повышение температуры тела, потеря массы тела, миалгии, артропатии, фоточувствительность, синдром Рейно (побледнение с последующим посинением и покраснением сосудов пальцев кистей и стоп), лейкопения и гемолитическая анемия);
при мониторинге течения системных заболеваний соединительной ткани.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины повышения специфичных АНА

Системная красная волчанка (у 10-40 % пациентов)
Смешанное заболевание соединительной ткани (редко)
Синдром Шегрена (редко)

Смешанное заболевание соединительной ткани (95-100 %)
СКВ (25-50 %)
Склеродермия (30 %)
Синдром Шегрена (15%)
Ревматоидный артрит (10 %)

СКВ (15-35 %)
Неонатальный волчаночноподобный синдром (100 %)
Склеродермия (60 %)
Ревматоидный артрит (10 %)
Синдром Шегрена (40-75 %)
Смешанное заболевание соединительной ткани (менее 5 %)

Синдром Шегрена (15-60 %)
СКВ (10-15 %)
Склеродермия (25 %)
Ревматоидный артрит (5 %)

Склеродермия, диффузная форма (20-60 %) в сочетании с легочным фиброзом
CREST-синдром
Изолированный синдром Рейно с последующим развитием склеродермии

Полимиозит, дерматомиозит (антитела выявляются у половины больных) в сочетании с легочным фиброзом

Антитела к гистонам

СКВ
Склеродермия
Лекарственная волчанка

Антитела к нуклеосомам

СКВ, ассоциированная с люпоидным церебритом (волчаночным психозом)

Что может влиять на результат?

Лекарственные препараты, способные повышать уровень Scl-70: аминосалициловая кислота, изониазид, метилдопа, пенициллин, пропилтиоурацил, стрептомицин, тетрациклин.
Антитела к гистонам могут появляться при лекарственной волчанке, вызванной приемом гидралазина, прокаинамида, хинидина.

Важные замечания

Результаты данного исследования должны интерпретироваться только комплексно, в сочетании с клиническими данными. Системное аутоиммунное заболевание при отсутствии клинической картины не может быть диагностировано только на основании выявления специфичных антинуклеарных антител.
Отрицательный результат иммуноблота не исключает системного аутоиммунного заболевания соединительной ткани.

Также рекомендуется

Антинуклеарный фактор на HEp-2 клетках
Диагностика полимиозита (антитела к антигенам Мi-2, Ku, Pm-Scl, антисинтетазные антитела (Jo-1, PL-7, PL-12))
Диагностика системной красной волчанки
Скрининг болезней соединительной ткани

Кто назначает исследование?

Литература

Назаренко Г. И., Кишкун А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. – М.: Медицина, 2000. – 533 с.
Fischbach F.T., Dunning M.B. A Manual of Laboratory and Diagnostic Tests, 8th Ed. Lippincott Williams & Wilkins, 2008: 1344 p.
Wilson D. McGraw-Hill Manual of Laboratory and Diagnostic Tests 1st Ed. Normal, Illinois, 2007: 666 p.
Sabatine. M. Pocket Medicine. 3d ed. USA, Philadelphia: LWW; 2008.

Антинуклерные антитела представляют семейство аутоантител, связывающихся с рибонуклеиновыми кислотами и ассоциированными с ними белками. Они встречаются более чем у 90% больных с диффузными болезнями соединительной ткани, а также часто отмечаются при аутоиммунных заболеваниях печени и ряде других состояний. На сегодняшний день охарактеризованы около 200 разновидностей этого семейства аутоантител, но не все они могут быть использованы в клинической практике.

Иммуноблот антинуклеарных антител позволяет в одном тесте одновременно провести исследование 15 основных разновидностей антинуклеарных антител, что обеспечивает проведение дифференциальной диагностики основных системных ревматических заболеваний. Каждая разновидность аутоантител, выявляемая с помощью иммуноблота, обычно отмечается у пациентов с характерной клинической картиной, поэтому спектр аутоантител позволяет не только диагностировать заболевание, но и установить риск развития определенных клинических проявлений.

Иммуноблот антинуклеарных антител целесообразно использовать на втором этапе серологического обследования при положительном результате других тестов, указывающих на присутствие в сыворотке обследуемого антинуклеарных антител. К таким тестам относятся определение антиядерных антител (скрининг ИФА №125 ), выявление антинуклеарного фактора (АНФ) на клетках Hep2 ( № 1267 ), антинуклеарных антител и антител к экстрагируемому ядерному антигену (ЭНА, № 825 ).

Метод иммуноблота антинуклеарных антител в диагностике системных ревматических заболеваний характеризуется высокой клинической специфичностью. Но специфику антинуклеарных антител даже при высоких титрах АНФ ( № 1267 ) удается установить не всегда, поскольку до сих пор остаются неохарактеризоваными ряд антигенов антинуклеарных антител. Отрицательный результат иммуноблота в этом случае не исключает диагноза системных ревматических заболеваний. Ряд антинуклеарных антител можно выявить с помощью иммуноблота – панель миозит-специфичных аутоантител ( № 939F8 ) и иммуноблота - панель аутоантител при склеродермии ( № 826 ).

Тест предназначен для определения антител к ядерным антигенам, используется в диагностике аутоиммунного заболевания – системной склеродермии.

Общая информация.

Аутоиммунные системные заболевания развиваются вследствие неадекватной реакции иммунной системы и продукции антител к собственным тканям и клеткам организма, поэтому характерно поражение многих органов и систем. При системной склеродермии преимущественно вырабатываются антитела к ядерным структурам клетки. Системная склеродермия проявляется поражением кожи и нарушением микроциркуляции органов и систем с дальнейшим развитием фиброза (замещения функциональной ткани соединительной тканью). Чаще поражаются легкие, пищевод, сердце и почки с развитием необратимых изменений при отсутствии лечения. Отдельно выделяют ограниченную форму системной склеродермии, когда поражается только кожа, что проявляется в виде утолщения кожи и подкожной клетчатки с нарушением подвижности в суставах.

Иммуноблот является подтверждающим тестом системной склеродермии при положительном результате антинуклеарного фактора на клеточной линии. Выявление антинуклеарных антител возможно при других аутоиммунных заболеваниях. Отрицательный результат не исключает системной склеродермии, при наличии симптомов, исследование должно быть продолжено.

С какой целью назначается исследование?

Для установления диагноза при наличии клинических признаков, подозрительных на системную склеродермию и формы системной склеродермии
Дифференциальная диагностика системных заболеваний
Как подтверждающий тест при наличии клиники и положительном результате антинуклеарного фактора
При наличии клинических данных, известных как CREST-синдром (включает кальцинаты мягких тканей, синдром Рейно, эзофагит, склеродактилия, елангиэктазии)
Для установления причины синдрома фиброза легких и легочной гипертензии

Как выполняется исследование?

ИФА, метод иммуноблоттинга

Как расшифровать результат иммуноблота?

Вариант нормы: антитела не обнаружены (отрицательный)

Формат выдачи результата – полуколичественный (в крестах) по каждому антигену отдельно. Результат может быть отрицательным (антитела не обнаружены), сомнительным (+), положительным (+++) и с выраженным количеством антител (++++).

Что означает выявление антител к каждому антигену (белку)?

Антитела (а/т) к белку топоизомеразе (Scl-70) – Выявляется при диффузных формах склеродермии, при поражении кожи и внутренних органов

А/т к к белкам центромер (CENТ A и CENT B) – являются главным диагностическим критерием CREST синдрома. Возможно их выявление при фиброзе легких и других аутоиммунных болезнях.

А/т к РНК полимеразам (RP11 и RP155) – показатель тяжелого течения с поражением внутренних органов

А/т к белкам фибриллярин и NOR90– достаточно точные маркеры системной склеродермии с поражением внутренних органов. Данные антитела обеспечивают ядрышковый тип свечения при исследовании антинуклеарного фактора.

А/т к белкам Th/To - характерны для лимитированной формы, поражения легочной ткани

А/т к Pm-Scl100, Pm-Scl75 – антитела, выявляемые при склеродермии и полимиозите (перекрестные). Определяются при поражении кожи, суставов, пищевода. Чаще встречаются в детском возрасте

А/т к Ku – перекрестные антитела при системной склеродермии и полимиозите, часто встречаются при поражении легких, других аутоиммунных процессах

А/т к PDGFR (тромбоцитарный фактор роста) – точный критерий системной склеродермии, встречается очень редко

А/т к Ro-52 (SSA-A 52 кДа) – неспецифичны, встречаются при многих системных заболеваниях

Возможно изолированное выявление антител или сочетанное (чаще). Результат интерпретируется лечащим врачом при анализе клиники, данных инструментальных и других лабораторных методов исследования.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Сдаётся венозная кровь, допускается взятие биоматериала в течение дня через 3 часа после приёма пищи, воду пить в обычном режиме.

Этот анализ принимается по сокращённому графику. Это связано с тем, что биоматериал должен попасть в лабораторию в очень короткий срок. Проверьте расписание сокращённого графика приёма на странице вашего отделения. При сдаче вне графика срок выполнения исследования может быть увеличен на 1-3 дня.

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ Антинуклеарные антитела при склеродермии (Scl-70, CENP A, CENP B, RP 11, RP 155, фибрилларин, NOR 90, Th/To, PM-Sc 100, PM-Scl 75, Ku, PDGR, Ro-52) и антинуклеарный фактор (АНФ), иммуноблот?

Дифференциальная диагностика системных ревматических заболеваний.
Подозрение на диффузную склеродермию и ее разновидности.
Системный склероз.
CREST-синдром (Кальцинаты мягких тканей, синдром Рейно, Эзофагит, Склеродактилия, Телангиэктазии).
Лимитированная и локализованная склеродермия.
Склеродактилия.
Синдром Рейно неуточненной этиологии
Фиброз легких и легочная гипертензия.

Подробное описание исследования

Метод выявления основных (Scl-70 и CENP-B), а также ряда минорных антител (в том числе PM-Scl и RNAPol), которые присущи основным клиническим формам диффузной склеродермии (например, СС или CREST), а их выявление указывает на активность и прогноз этого заболевания.

Важные замечания

Формат представления результатов, единицы измерения [и анализатор по возможности].

Полуколичественное исследование, интенсивность реакции пропорциональна содержанию аутоантител к конкретным антигенам, оценивается в крестах по результатам денситометрии.

Подготовка к исследованию

Кровь рекомендуется сдавать натощак (между последним приемом пищи и взятием крови должно пройти не менее 8 часов, воду можно пить в обычном режиме), накануне исследования – легкий ужин с ограничением жирной пищи.
За 1–2 часа до сдачи крови следует воздержаться от курения, не употреблять сок, чай, кофе (можно пить негазированную воду). Исключить физическое напряжение (бег, быстрый подъем по лестнице), эмоциональное возбуждение.
За 24 часа до исследования необходимо исключить алкоголь, интенсивные физические нагрузки, прием лекарственных препаратов (по согласованию с врачом).
Не следует сдавать кровь для лабораторного исследования сразу после физиотерапевтических процедур, инструментального обследования, рентгенологического и ультразвукового исследований, массажа и других медицинских процедур.

Противопоказания и ограничения

Абсолютных противопоказаний нет.

Интерпретация результата

Отрицательный результат иммуноблота антинуклеарных антител при склеродермии значительно снижает вероятность диагноза системной склеродермии. Ложноотрицательный результат данного теста может встречаться при выявлении антител, характерных для системной красной волчанки, синдрома Шегрена, дерматомиозита/полимиозита, а также при смешанном заболевании соединительной ткани (синдром Шарпа). При подозрении на другие системные аутоиммунные заболевания рекомендуется выполнение иммуноблота при полимиозите и иммуноблота антинуклеарных антител.

Положительный результат иммуноблота антинуклеарных антител при склеродермии:

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ Антинуклеарные антитела при склеродермии (Scl-70, CENP A, CENP B, RP 11, RP 155, фибрилларин, NOR 90, Th/To, PM-Sc 100, PM-Scl 75, Ku, PDGR, Ro-52) и антинуклеарный фактор (АНФ), иммуноблот?

Дифференциальная диагностика системных ревматических заболеваний.
Подозрение на диффузную склеродермию и ее разновидности.
Системный склероз.
CREST-синдром (Кальцинаты мягких тканей, синдром Рейно, Эзофагит, Склеродактилия, Телангиэктазии).
Лимитированная и локализованная склеродермия.
Склеродактилия.
Синдром Рейно неуточненной этиологии
Фиброз легких и легочная гипертензия.

Подробное описание исследования

Важные замечания

Формат представления результатов, единицы измерения [и анализатор по возможности].

Подготовка к исследованию

Кровь рекомендуется сдавать натощак (между последним приемом пищи и взятием крови должно пройти не менее 8 часов, воду можно пить в обычном режиме), накануне исследования – легкий ужин с ограничением жирной пищи.
За 1–2 часа до сдачи крови следует воздержаться от курения, не употреблять сок, чай, кофе (можно пить негазированную воду). Исключить физическое напряжение (бег, быстрый подъем по лестнице), эмоциональное возбуждение.
За 24 часа до исследования необходимо исключить алкоголь, интенсивные физические нагрузки, прием лекарственных препаратов (по согласованию с врачом).
Не следует сдавать кровь для лабораторного исследования сразу после физиотерапевтических процедур, инструментального обследования, рентгенологического и ультразвукового исследований, массажа и других медицинских процедур.

Противопоказания и ограничения

Абсолютных противопоказаний нет.

Интерпретация результата

Положительный результат иммуноблота антинуклеарных антител при склеродермии:

Читайте также: