Адгезия кожи что это

Обновлено: 02.05.2024

Нарушения функции фагоцитов. Генетические причины недостаточности адгезии лейкоцитов

В защите кожи и слизистых оболочек от чужеродных агентов наиболее важная роль принадлежит нейтрофилам. Фагоциты должны появляться в очаге воспаления уже в первые 2-4 ч после проникновения микробов в ткань. В противном случае может произойти местная и гематогенная диссеминация инфекции.

Оценка состояния иммунитета при подозрении на иммунодефицит, особенно при рецидивирующих или необычных бактериальных инфекциях, свидетельствующих о нарушении функции фагоцитов, крайне трудна. Сложность дифференциальной диагностики обусловлена сходством клинических проявлений дефектов нейтрофилов, антителообразования и комплемента. Нарушение фагоцитарной функции у больного с рецидивирующими или необычными инфекциями следует предполагать в случае нормальных результатов первичного иммунологического исследования. Наследственные нарушения фагоцитов встречаются редко, но выяснение их молекулярных механизмов вносит неоценимый вклад в понимание нормальной функции нейтрофилов.

Хемотаксис, миграция клеток в очаги воспаления, включает несколько этапов. Исследования нарушенного in vitro хемотаксиса нейтрофилов у детей с различными заболеваниями не позволяют установить, являются ли рецидивирующие инфекции следствием нарушения хемотаксиса или обусловлены осложнениями основного заболевания. Синдром гиперпродукции IgE характеризуется снижением подвижности нейтрофилов на фоне высокого уровня IgE, что приводит к развитию хронического дерматита и рецидивирующим синуситам и пневмониям. Для детей с этим синдромом характерны грубые черты лица, задержка прорезывания молочных зубов и повышение частоты переломов.

Генетические причины недостаточности адгезии лейкоцитов

Недостаточность адгезии лейкоцитов-1 и -2 (НАЛ-1 и НАЛ-2) — редкая аутосомно-рецессивная патология. НАЛ-1 встречается с частотой около 1:10 000 000 и характеризуется повторными бактериальными и грибковыми инфекциями, а также ослаблением воспалительных реакций, несмотря на выраженный нейтрофильный лейкоцитоз.

В основе недостаточности адгезии лейкоцитов-1 лежат мутации гена, расположенного на хромосоме 21 (участок q22.3) и кодирующего CD18 — b2-субъединицу лейкоцитарных интегринов с молекулярной массой 95 кДа. Нормальные нейтрофилы экспрессируют на мембране три гетеродимерные молекулы адгезии, носящие названия LFA-1 (CDlla/CD18), Мас-1 (CDllb/CD18; она же CR3, или рецептор iC3b) и р150,95 (CD11C/CD18). Эти три трансмембранные молекулы состоят из уникальных а1-субъединиц с молекулярной массой соответственно 185, 190 и 150 кДа, кодируемых генами на хромосоме 16, и общей Р2-субъединицы.

Эти лейкоцитарные интегрины обеспечивают прочную адгезию нейтрофилов на поверхности эндотелиальных клеток, извлекая нейтрофилы из циркуляции, и адгезию на микроорганизмах, покрытых iC3b. В результате происходит фагоцитоз микробов и активируется НАДФ-зависимая оксидаза.

Мутации гена CD 18 нарушают синтез мРНК или изменяют структуру синтезируемого пептида, нарушая его посттрансляционный процессинг или полностью лишая нейтрофилы комплекса CD11/ CD18. Полимеры CDllа1-субъединиц нестабильны, и дефицит трех таких субъединиц на нейтрофилах лежит в основе НАЛ-1. При некоторых мутациях генов CD11/CD18 сборка и функциональная активность интегриновых молекул в той или иной степени сохраняются, заболевание у детей проявляется не в самой тяжелой форме. При полном же отсутствии b2-интегринов нейтрофилы не попадаю т в очаги воспаления вне легких, поскольку не обазуют прочных связей с эндотелием. Неспособность лишенных комплекса CD11/CD18 нейтрофилов проникать сквозь эндотелий обусловлена связыванием b2-интегринов с внутриклеточными молекулами адгезии ICAM-1 и ICAM-2, которые экспрессируются эндотелиальными клетками при воспалении.

Нейтрофилы, проникшие в легочный очаг воспаления независимым от CD11/CD18 путем, не «узнают» микроорганизмы, покрытые опсонизирующим фрагментом комплемента iC3b. Этот важнейший стабильный опсонин образуется при расщеплении С3b его инактиватором. В норме связывание с iC3b активирует другие функции нейтрофилов — дегрануляцию и окислительный обмен, поэтому при НАЛ-1 резко нарушаются и эти функции. В результате у больных возрастает предрасположенность к тяжелым и повторным бактериальным инфекциям.

В отсутствие комплекса CD11/CD18 моноциты не связываются с фибриногеном, что снижает их роль в заживлении ран.

При недостаточности адгезии лейкоцитов-2 (имеющей общие клинические проявления с НАЛ-1) интегрины CD11/CD18 нормальны. НАЛ-2 характеризуется неврологическими нарушениями, дефектами строения черепа и лица и фенотипом эритроцитов Bombay. В основе НАЛ-2 лежит дефект специфического транспортера ГДФ-L-фукозы в аппарате Гольджи, и фукоза не включается в гликопротеиды клеточной поверхности. В результате меняются углеводные маркеры эритроцитов, определяющие группы крови, и нарушается адгезия нейтрофилов. Нейтрофилы больных с НАЛ-2 лишены углеводной структуры сиалил-Lex, необходимой для их адгезии к активированным эндотелиальным клеткам. Поэтому такие нейтрофилы не «приклеиваются» к стенкам воспаленных венул, не активируются и не покрывают эндотелий.

ГОСТ Р ИСО 2411-2014

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Ткани с резиновым или пластмассовым покрытием. Метод определения адгезии покрытия

Textiles. Rubber- or plastics-coated fabrics. Method for determination of coating adhesion

Дата введения 2016-01-01

1 ПОДГОТОВЛЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 412 "Текстиль", Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Управлением технического регулирования и стандартизации Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 25 декабря 2014 г. N 2103-ст

4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 2411:2000* "Ткани с резиновым или пластмассовым покрытием. Определение адгезии покрытия" (ISO 2411:2000 "Rubber- or plastics-coated fabrics - Determination of coating adhesion").

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5 (пункт 3.5).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты Российской Федерации, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения прочности адгезии тканей с покрытием.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие международные стандарты*:

* Таблицу соответствия национальных стандартов международным см. по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.

ИСО 2231:1989 Ткани с резиновым и пластмассовым покрытием. Стандартные атмосферные условия для кондиционирования и испытаний (ISO 2231:1989 Rubber- or plastics-coated fabrics. Standard atmospheres for conditioning and testing)

ИСО 2286-1:1998 Прорезиненные или покрытые пластмассой ткани. Определение характеристик рулона. Часть 1. Методы определения длины, ширины и массы нетто (ISO 2286-1:1998 Rubber- or plastics-coated fabrics - Determination of roll characteristics - Part 1: Methods for determination of length, width and net mass)

ИСО 2286-2:1998 Прорезиненные или покрытые пластмассой ткани. Определение характеристик рулона. Часть 2. Методы определения общей массы на единицу площади, массы на единицу площади покрытия и массы на единицу площади подложки (ISO 2286-2:1998 Rubber- or plastics-coated fabrics - Determination of roll characteristics - Part 2: Methods for determination of total mass per unit area, mass per unit area of coating and mass per unit area of substrate)

ИСО 2286-3:1998 Прорезиненные или покрытые пластмассой ткани. Определение характеристик рулона. Часть 3. Метод определения толщины (ISO 2286-3:1998 Rubber- or plastics-coated fabrics: - Determination of roll characteristics - Part 3: Methods for determination of thickness)

ИСО 5893:2002 Оборудование для испытаний резины и пластмассы. Аппаратура для испытаний растяжением, сгибанием и сдавливанием (постоянная скорость воздействия). Технические условия [ISO 5893:2002 Rubber and plastics test equipment - Tensile, flexural and compression types (constant rate of traverse). Specification)]

ИСО 7500-1:2004 Материалы металлические. Проверка одноосных испытательных машин для испытаний при статических нагрузках. Часть 1. Машины для испытания на растяжение/сжатие. Проверка и калибровка силоизмерительных систем (ISO 7500-1:2004 Metallic materials - Verification of static uniaxial testing machines - Part 1: Tension/compression testing machines. Verification and calibration of the force-measuring system)

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 расслоение (delamination): Частичное или полное отделение двух или более составляющих слоев ткани с покрытием. Это может быть отделение ткани от полимера или отделение внутри полимерного слоя.

3.2 шелушение покрытия (coating to fabric peel): Отделение без сохранения на подложке остатка покрывающего полимера.

3.3 частичный отрыв пленки (partial film tear): Расслоение, оставляющее участки сцепленного с подложкой покрывающего полимера.

3.4 неотделимый (inseparable): Неспособность покрытия шелушиться, поскольку оно разрушается в процессе подготовки или испытания, показывая, что прочность адгезии покрытия больше прочности полимерного покрытия.

3.5 расслоение покрытия или пленки (coating or film delamination): Расслаивание многослойного покрытия, оставляющее один или более слоев покрытия или остатки пленки на подложке.

3.6 повреждение ткани (fabric failure): Разрушение подложки в процессе испытания, показывающее, что прочность адгезии покрытия больше, чем прочность подложки.

3.7 расслоение ткани (fabric delamination): Расщепление или расслоение подложки, оставляющее сцепленными с покрытием часть слоя или целиком слоистый материал ткани.

Примечание - Примером такой ситуации является случай многослойных нетканых материалов с покрытием, когда может произойти расслоение основы нетканого материала из-за того, что прочность адгезии покрытия окажется больше, чем прочность сцепления между волокнами основы.

3.8 подложка (substrate): Текстильный компонент ткани с покрытием.

4 Приготовление образцов для испытаний

4.1 Общие вопросы

Для определения адгезии покрытия все образцы для испытаний должны быть взяты из пригодной для использования части ткани с покрытием (в соответствии с ИСО 2286-1).

Каждый образец для испытаний должен быть шириной не менее 75 мм и длиной не менее 200 мм.

Пять образцов для испытаний должны быть вырезаны по длине, расположенной в продольном направлении испытуемой ткани с покрытием, и пять образцов для испытаний по длине, расположенной в ее поперечном направлении.

В случае тканей с подложками, имеющими ворс, приготавливают 10 образцов для испытаний в продольном направлении, пять - в направлении ворса и пять - против направления ворса.

Могут быть использованы другие методы приготовления образцов. Применимость метода приготовления определяют с помощью предварительного испытания.

Примечание - Обычно толстые покрытия обрабатывают методом 1, тонкие - методом 2.

4.2 Метод приготовления 1

4.2.1 Когда прочность слоя покрытия превосходит силу адгезионной связи в подложке, образец для испытаний приготавливают аккуратным разрезом покрытия в направлении подложки под прямым углом к длине образца для испытаний. Начиная с этого разреза, аккуратно отделяют покрывающую пленку от подложки на расстоянии, достаточном для того, чтобы иметь возможность разместить концы образца для испытаний в зажимах испытательной аппаратуры. Подрезают ширину образца для испытаний до (50±5) мм, стараясь избежать разрушения продольных нитей подложки.

4.2.2 Кондиционируют образцы для испытаний при одном из атмосферных условий, установленных в ИСО 2231.

4.2.3 После кондиционирования помещают образец для испытаний в испытательную аппаратуру, закрепляя конец с покрытием в неподвижном зажиме, а покрывающую пленку в движущемся зажиме (см. рисунок 1).

Примечание - Когда сцепление очень сильное и невозможно отделить вручную покрывающую пленку от подложки, следует использовать метод приготовления 2, изложенный в 4.3.

1 - неподвижный зажим; 2 - покрытие; 3 - контрольные метки; 4 - подложка; 5 - подвижный зажим

Рисунок 1 - Держатель толстых покрытий

4.3 Метод приготовления 2

4.3.1 Когда слой покрытия недостаточно прочен, чтобы его можно было отделить от подложки в виде непрерывного участка, но когда он четко отличим от подложки и может быть вырезан отдельно, соединяют два образца для испытаний из одного и того же материала "лицом к лицу", оставляя первые 50 мм несцепленными, и оценивают систему адгезии, свойственную этому типу покрытия.

Примечание 1 - Когда покрытая поверхность обрабатывается каким-либо способом, например, силицированием (siliconising), который может ослаблять связь "покрытие-покрытие", рекомендуется, чтобы испытание адгезии проводилось до такой обработки.

Примечание 2 - Если необходимо, допускается использование хлопковой ткани миткалевого переплетения, расшлихтованной и отбеленной, чтобы обеспечить полное удаление остатков растворителя.

Примечание 3 - В качестве альтернативы при испытаниях тканей, покрытых PU (полиуретаном), может быть использован лист резины вместо одного из образцов с покрытием. Состав резиновой смеси должен быть таким, какой используют для изготовления листов с низкой жесткостью и низким растяжением.

4.3.2 Чтобы обеспечить хорошее сцепление, композитный образец для испытаний должен быть прокатан по крайней мере дважды валиком шириной 76 мм и массой 2 кг.

4.3.3 Могут быть использованы все типы связующих веществ, например, основанные на растворителях, на водной основе, реакционные горячие расплавы. Когда возможно, следует использовать адгезионную систему, согласованную между теми, кто несет ответственность за проведение испытаний, и теми, кому предназначены результаты испытаний.

4.3.4 Применяют связующее вещество строго в соответствии с рекомендациями его поставщика. Выдерживают достаточное время, чтобы соединение достигло оптимальной прочности, переворачивают непокрытую длину одного из образцов для испытаний и аккуратно отрезают от подложки по линии адгезии.

Аккуратно отделяют подложку от ее покрытия на расстоянии, достаточном для того, чтобы получить возможность закрепить концы образца для испытаний в зажимах испытательной аппаратуры. Подрезают образец для испытаний на каждом крае до ширины (50±5) мм, стараясь избежать разрушения продольных нитей подложки.

4.3.5 Кондиционируют образцы для испытаний при одном из атмосферных условий, установленных в ИС0 2231.

4.3.6 После кондиционирования помещают образец для испытаний в испытательную аппаратуру, закрепляя конец испытуемого образца в неподвижном зажиме, а нелипкий покрытый конец - в движущемся зажиме испытательной аппаратуры (см. рисунок 2).

1 - неподвижный зажим; 2 - покрытие 1; 3 - контрольные метки; 4 - подложка 1; 5 - подвижный зажим; 6 - подложка 2; 7 - покрытие 2

Рисунок 2 - Держатель тонких покрытий и покрытий с низкой прочностью адгезии

4.4 Определение адгезии мокрого покрытия

4.4.1 Конечное использование

Часто бывает желательно, если ткань с покрытием используется во влажной или мокрой среде, измерять прочность адгезии покрытия на мокрой ткани. Проводя такие испытания, важно, чтобы процедуры по 4.4.2 и 4.4.3 проводились до любой силиконовой отделки, поскольку установлено, что попытки удалить силикон могут существенно воздействовать на адгезию покрытия и тем самым привести к результату, вводящему в заблуждение.

4.4.2 Приготовление образцов для испытаний

Образцы для испытаний приготавливают в соответствии с 4.2 или 4.3.

Полностью погружают образцы на (1±0,1) ч в водный раствор неионного смачивающего агента концентрацией не более 0,1% (по объему) при температуре, отвечающей стандартным атмосферным условиям в соответствии с ИСО 2231, используя модуль ванны (liquor ratio) приблизительно 20:1. Если предполагается, что равновесное увлажнение не достигается в течение часа, тогда используют время погружения (6±0,25) ч или (24±0,25) ч. Это время должно быть указано в протоколе испытаний.

4.4.3 Проведение испытания

Вынимают образец для испытаний из смачивающего раствора, указанного в 4.4.2, и сразу же, не допуская высушивания, проводят испытание в соответствии с разделом 6.

5 Аппаратура

Для испытаний используют машину с постоянной скоростью перемещения (CRT), обозначенную как класс В в соответствии с ИСО 5893, или машину с постоянной скоростью растяжения (CRE), имеющую класс прецизионности 1 в соответствии с ИСО 7500-1. Машина должна быть снабжена подходящей регистрирующей системой для измерения изменения приложенной нагрузки.

Центральные точки двух зажимов машины должны быть расположены на линии натяжения, передние края должны находиться под прямыми углами к линии натяжения, и захватывающие грани обоих зажимов должны быть расположены в одной и той же плоскости. Зажимы должны быть в состоянии удерживать образец для испытаний, не допуская его проскальзывания, и спроектированы таким образом, чтобы они не перерезали или ослабляли каким-либо другим образом образец для испытаний, по ширине они не должны быть меньше ширины образца для испытаний. Грани зажимов должны быть гладкими и ровными, за исключением случаев, когда образец для испытаний, даже с прокладкой, не может удовлетворительно ими удерживаться, когда используют рельефные зажимы. Подходящие прокладочные материалы для использования с гладкими или рельефными зажимами включают бумагу, войлок, кожу, листы пластика или резины.

6 Процедура

Настраивают разрывную испытательную машину таким образом, чтобы обеспечить скорость движения зажима (100±10) мм/мин. Выбирают подходящий диапазон значений нагрузок.

Закрепляют разделенные слои подготовленного образца для испытаний в зажимах машины в центральной позиции, без неуравновешенного натяжения или чрезмерного провисания испытуемого образца, как показано на рисунке 1 или рисунке 2. На образец для испытаний наносят контрольные метки, отстоящие друг от друга на расстоянии 50 мм, как показано на рисунке 1 и рисунке 2.

Приводят подвижный зажим в движение и получают запись колебания приложенной нагрузки в процессе разделения слоев. Следят за расстоянием между контрольными точками, на ленте самописца отмечают на кривой приложенной нагрузки момент, когда разделится 20 мм ткани с покрытием. Продолжают отделение на расстоянии приблизительно 100 мм так, чтобы контрольные отметки на образце для испытаний отдалились друга от друга на расстояние не менее 200 мм по сравнению с тем положением, в котором они находились в начале испытания, т.е. ткань с покрытием должна быть разделена на участке длиной 100 мм.

ГОСТ ИСО 11644-2002

Метод определения адгезии покрытия

Leather. Method for determination of adhesion of finish

Дата введения 2003-07-01

1. РАЗРАБОТАН Научно-производственным комплексом министерства промышленности Республики Армения

ВНЕСЕН Управлением стандартизации, метрологии и сертификации при правительстве Республики Армения

2 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 21 от 30 мая 2002 г.)

За принятие проголосовали:

Наименование национального органа по стандартизации

Госстандарт Республики Беларусь

Госстандарт Республики Казахстан

3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 11644-93 "Кожа. Метод определения адгезии покрытия" и предназначен для применения только при проведении научно-исследовательских работ

4 Постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации и метрологии от 24 декабря 2002 г. N 501-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ИСО 11644-2002 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 июля 2003 г.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

1 Область применения

1.1 В зависимости от способа отделки кожи адгезия покрытия к коже может быть настолько низка по всей поверхности или на отдельных ее участках, что в процессе использования покрытие может отслаиваться от кожи.

Для кожи с покрытием из нескольких слоев отслаивание может происходить между слоями, например между пигментным слоем и основным покрытием.

Настоящий стандарт устанавливает метод измерения адгезии покрытия к коже или адгезии между двумя смежными слоями покрытия.

1.2 Метод распространяется на все виды кож, позволяющие осуществить приклеивание покрытия кожи к сцепляющей пластине при условии отсутствия проникновения клея в покрытие.

Может возникнуть необходимость в предварительных экспериментах с целью определения выполнения этих условий.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ИСО 105-А02-93* Материалы текстильные. Определение устойчивости окраски. Часть А-02. Серая шкала для оценки изменения окраски

ИСО 2419-72* Кожа. Кондиционирование образцов для физических испытаний

ИСО 3696-87* Вода для лабораторного анализа. Технические условия и методы испытаний

* Международные стандарты - во ВНИИКИ Госстандарта России.

В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:

3.1 адгезия (adhesion): Сила, необходимая для отрыва слоя покрытия от кожи, приложенная равномерно под углом около 90° к твердой сцепляющей пластине, к которой приклеена кожа отделанной поверхностью.

4 Принцип действия

Отделанную поверхность полоски кожи приклеивают к сцепляющей пластине с помощью термореактивного клея.

Силу прикладывают к свободному концу полоски кожи для отслоения от нее покрытия на определенной длине. При этом покрытие остается на сцепляющей пластине вместе со слоем клея.

Необходимая сила для отрыва измеряется и записывается как адгезия покрытия к коже.

Испытания проводят в условиях нормальной относительной влажности и температуры.

При необходимости можно провести испытание предварительно увлажненных образцов.

5 Аппаратура и материалы

5.1 Разрывная машина вертикального типа с соответствующим диапазоном измеряемых нагрузок (тип РМ-3 или РМ-30).

5.1.1 Соответствующий диапазон измеряемых нагрузок.

5.1.2 Скорость перемещения зажимов (100±5) мм/мин.

5.1.3 Соответствующие средства крепления: держатель сцепляющей пластины (5.3) и захватывающий крюк (5.4).

5.1.4 Устройство для записи диаграммы "сила-перемещение" в течение испытания.

5.2 Сцепляющая пластина из жесткого поливинилхлорида (ПВХ) или другого аналогичного материала размером 70х20х3 мм, к которой должен быть приклеен образец кожи. Предпочтительно применять ПВХ с высоким поглощением инфракрасного излучения.

5.3 Держатель сцепляющей пластины (рисунок 1) из алюминия служит для удерживания сцепляющей пластины, к которой должен быть приклеен образец кожи. Держатель крепится к нижнему зажиму разрывной испытательной машины.

Рисунок 1 - Держатель сцепляющей пластины

5.4 Захватывающий крюк, выполненный, например, из стальной проволоки диаметром 1-2 мм длиной около 25 см для прикрепления свободного конца образца кожи к верхнему зажиму разрывной испытательной машины (рисунки 2 и 3).

Рисунок 2 - Захватывающий крюк

Рисунок 3 - Устройство для испытания образца

5.5 Пробойник для пробивания отверстия диаметром 2-3 мм в образце кожи.

5.6 Двухкомпонентный полиуретановый клей, содержащий смолу и отвердитель. Обычно 20 г твердой смолы растворяют в 80 г этилацетата и добавляют 5 г отвердителя, если нет других указаний производителя клея. Клей должен быть использован в течение 8 ч после добавления отвердителя, если нет других указаний производителя клея.

5.7 Инфракрасная лампа , способная нагревать сцепляющую пластину (5.2) до 80 °С, или печь, поддерживающая температуру (85±3) °С с циркуляцией воздуха.

5.8 Гиря массой 4,5 кг с плоской поверхностью.

5.9 Температурный индикатор - вещество, расплавляющееся при 80 °С, служащее для определения момента, когда температура сцепляющей пластины достигает 80 °С, если используется инфракрасная лампа.

5.10 Очищающий растворитель: гексан или смесь алканов температурой кипения от 40 до 80 °С (например, эфир бензина) для очищения поверхности сцепляющей пластины и отделанной поверхности образца кожи перед склеиванием.

5.11 Резак для вырубания образца кожи размером 100х10 мм.

5.12 Аппаратура для увлажнения испытываемого образца, включающая элементы, перечисленные в 5.12.1-5.12.3 (применяется только для испытания увлажненной кожи).

5.12.1 Вакуумный сушильный шкаф или стеклянный резервуар, пригодный для создания вакуума.

5.12.2 Вакуумный насос, способный в течение 4 мин довести давление до 5 кПа (50 мбар).

5.12.3 Мензурка с дистиллированной водой температурой 20 °С, в которую помещают испытываемые образцы кожи (приклеенные к сцепляющей пластине).

При этом образцы должны быть полностью погружены в воду.

5.13 Серая шкала для определения степени изменения цвета в соответствии с ИСО 105-А02 (она необходима только для образцов, у которых произошло изменение цвета после испытания и повторной отшлифовки).

5.14 Деминерализованная вода третьей степени очистки в соответствии с ИСО 3696.

6 Подготовка образцов к испытанию

6.1 Расположение и количество

Из кожи, подлежащей испытанию, резаком вырубают образцы размером 100х100 мм из участка, предусмотренного ИСО 2418. Адгезия покрытия может значительно меняться даже в пределах одного куска кожи, поэтому рекомендуется отбор проб осуществлять не только из участка, предусмотренного ИСО 2418, но и из пол и воротка. Все образцы выдерживают при температуре (20±2) °С и относительной влажности (65±2)% (ИСО 2419).

Для испытания отбирают не менее четырех образцов: два в продольном направлении и два в поперечном направлении относительно хребтовой линии.

6.2 Пробивание отверстий

Пробойником (5.5) пробивают отверстия диаметром 2-3 мм по средней линии каждого образца на расстоянии 5 мм от края.

6.3 Прикрепление образца к сцепляющей пластине

6.3.1 Очищают поверхность сцепляющей пластины (5.2), к которой должен быть приклеен образец кожи и отделанную поверхность кожи чистой тканью, смоченной в растворителе (5.10).

Предостережение - Работы проводить под вытяжной вентиляцией и избегать попадания растворителя на кожу лица и рук.

6.3.2 На очищенную поверхность сцепляющей пластины наносят с помощью кисти тонкий слой клея, выдерживают при комнатной температуре не менее 30 мин. Сцепляющая пластина должна быть использована в течение 8 ч после нанесения клея. Клей необходимо наносить равномерно. Для кожи с крупным рисунком клей необходимо наносить в несколько слоев, чтобы обеспечить полное заполнение пор кожи.

6.3.3 Слой клея на сцепляющей пластине нагревают до 80 °С с помощью инфракрасной лампы или выдерживанием в печи в течение 10 мин при температуре 85 °С (перед испытанием с помощью запасной сцепляющей пластины и температурного индикатора (5.9), проверяют, действительно ли температура сцепляющей пластины достигла 80 °С). Сразу после этого на сцепляющую пластину помещают образец кожи покрытием вниз так, чтобы концы образца кожи выступали за сцепляющую пластину на 15 мм с каждой стороны, а сверху, не менее чем на 2 мин, кладут гирю (5.8).

Примечание - При испытании образцов кожи с рельефным рисунком до наложения гири прикатать поверхность ручным роликом с умеренным нажимом.

7 Кондиционирование образцов для испытаний

7.1 Адгезия определяется обычно на сухих образцах, выдержанных в нормальных атмосферных условиях, описанных в 7.5. Изменение этих условий может влиять на адгезию.

ГОСТ ISO 11644-2013

Метод определения адгезии отделочного покрытия

Leather. Method of determination of adhesion of finish

Дата введения 2015-07-01

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 412 "Текстиль", Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") на основе аутентичного перевода стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 декабря 2013 г N 63-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Минэкономики Республики Армения

Госстандарт Республики Беларусь

Госстандарт Республики Казахстан

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 ноября 2014 г. N 1888* межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 11644-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 11644:2009* Leather - Test for adhesion of finish (Кожа. Испытание на прочность адгезии отделочного покрытия).

Перевод с английского языка (en).

Степень соответствия - идентичная (IDT).

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования международного стандарта в связи с особенностями построения межгосударственной системы стандартизации.

В разделе "Нормативные ссылки" ссылки на международные стандарты актуализированы.

Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА.

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения адгезии слоя отделочного покрытия к коже или адгезии между двумя смежными слоями отделочного покрытия.

Данный метод применим для всех типов выделанных кож с гладкой поверхностью, которые можно приклеить к удерживающей пластине таким образом, чтобы клей не проник внутрь отделочного покрытия. Для определения выполнения этих условий могут понадобиться предварительные испытания.

Метод испытаний применим для выделанных кож с толщиной отделочного покрытия не менее 15 мкм.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте используются ссылки на следующие международные стандарты*:

ISO 105-А02:1993 Textiles - Tests for colour fastness - Part A02: Grey scale for assessing change in colour (Текстиль. Определение устойчивости окраски. Часть А02. Серая шкала для оценки изменения окраски)

ISO 2418:2002 Leather - Chemical, physical and mechanical and fastness tests - Sampling location (Кожа. Химические, физические и механические испытания и испытания на прочность. Определение местоположения образца)

ISO 2419:2012 Leather - Physical and mechanical tests - Sample preparation and conditioning (Кожа. Физические и механические испытания. Подготовка образцов и кондиционирование)

ISO 3696:1987 Water for analytical laboratory use. Specification and test method (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1 адгезия: Сила, необходимая для отрыва кожи от слоя отделочного покрытия, равномерно приложенная под углом около 90° к жесткой удерживающей пластине, приклеенной к отделанной поверхности кожи.

4 Принцип

Часть отделанной поверхности полоски кожи приклеивают к пластине с помощью клеящей пленки. К свободному концу полоски прикладывают силу таким образом, чтобы отделить кожу от отделочного покрытия на определенную длину. При этом слой отделочного покрытия остается на удерживающей пластине вместе с клеящей пленкой. Измеряют и записывают необходимую силу как значение адгезии отделочного покрытия.

Испытание проводят с образцами, прошедшими перед испытанием кондиционирование в стандартных атмосферных условиях. При необходимости можно провести дополнительное испытание увлажненных образцов или образцов, предварительно обработанных другими способами.

5 Аппаратура и материалы

5.1 Разрывная машина со следующими характеристиками:

a) диапазон усилий, подходящий для испытуемого образца;

b) постоянная скорость перемещения зажимов (100±5) мм/мин;

с) соответствующие средства крепления: держатель удерживающей пластины (5.3), захватывающий крюк (5.4) или зажим (5.5).

5.2 Удерживающая пластина представляет собой кусок жесткого поливинилхлорида (ПВХ) или другого подходящего материала размером примерно 70203 мм, на который приклеивают образец кожи. Предпочтительно применять ПВХ с высоким поглощением инфракрасного излучения.

5.3 Держатель удерживающей пластины (см.рисунок 1) из любого подходящего материала, на которую приклеен образец кожи, который располагается в нижнем зажиме разрывной машины. Альтернативно пластина может быть жестко закреплена шурупами, расположенными в боковинах держателя пластины (см.рисунок 5).

Рисунок 1 - Держатель прилегающей пластины (±2 мм для стороны длиной 35 мм, ±1 мм - для других размеров)

5.4 Захватывающий крюк из стальной проволоки диаметром 1-2 мм длиной не менее 200 мм для прикрепления свободного конца образца кожи к верхнему зажиму разрывной машины (см.рисунки 2 и 4). Длина захватывающего крюка обеспечивает постоянный угол отрыва, близкий к 90°.

5.5 Лабораторный винтовой зажим с плоскими тисками (см.рисунок 3) для зажима образца кожи с соответствующим устройством для присоединения лабораторного зажима к верхнему зажиму разрывной машины (см.рисунок 5). Длина этого приспособления должна составлять примерно 250 мм, чтобы обеспечить постоянный угол отрыва, близкий к 90°.

В качестве альтернативы можно использовать устройство с плоскими тисками, прикрепленное непосредственно к разрывной машине так, что в течение испытания сохраняется угол отрыва величиной 90°.

5.6 Пробойник для пробивания отверстия диаметром 2-3 мм в образце кожи в случае использования захватывающего крюка (5.4).

Рисунок 2 - Захватывающий крюк

Рисунок 3 - Зажим с плоскими тисками

5.7 Клей для приклеивания образца кожи к удерживающей пластине. Клеи, обеспечивающие пригодные и воспроизводимые результаты, могут быть следующими:

- однокомпонентный цианоакрилатный клей моментального типа, очень быстро затвердевающий и склеивающий, обеспечивающий предотвращение проникновения клея сквозь слой отделки;

- двухкомпонентный полиуретановый клей, состоящий из смолы и отвердителя. В этом случае обычно растворяют 20 г твердой смолы в 80 г этилацетата и добавляют 5 г отвердителя, если нет других указаний производителя клея. Клей должен быть использован в течение 8 ч после добавления отвердителя, если нет других указаний производителя клея.

Примечание - Примеры имеющихся в продаже подходящих типов клея приведены в приложении А.

5.8 Инфракрасная лампа или печь, способная нагревать удерживающую пластину (5.2) и таким образом активирующая клей. Такая лампа (печь) требуется только в том случае, когда используется двухкомпонентный клей.

5.9 Гиря массой приблизительно 4,5 кг с плоским основанием.

5.10 Очищающий растворитель: гексан или смесь насыщенных углеводородов с температурой кипения от 40°С до 80°С (например, петролейный эфир) для очищения поверхности удерживающей пластины и отделанной поверхности образца кожи перед склеиванием.

5.11 Резак для вырезания образца кожи размером (100±2) мм(10±1) мм в один прием.

5.12 Аппаратура для увлажнения испытуемого образца, включающая элементы, перечисленные в 5.12.1-5.12.3. Эта аппаратура требуется только для испытания увлажненной кожи.

5.12.1 Вакуумный сушильный сосуд или другой стеклянный резервуар, пригодный для создания вакуума.

5.12.2 Вакуумный насос, способный в течение примерно 4 мин снизить давление воздуха в сушильном сосуде (5.12.1) до уровня примерно 5 кПа (50 мбар).

5.12.3 Мензурка, наполненная дистиллированной водой, имеющей температуру примерно 20°С, в которую можно полностью погрузить испытуемые образцы (образцы кожи, приклеенные к удерживающей пластине).

1 ГУ Московский областной научно-клинический исследовательский институт им. М.Ф. Владимирского, Москва

2 ФГУ «Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов им. ак. В.И. Шумакова» Минздравсоцразвития России, Москва

Кадгерины представляют собой разнообразную группу кальций-зависимых гликозилированных протеинов. Аномалия экспрессии или дисфункция этих молекул, приводят к серьезным деструктивным последствиям. При аутоиммунных буллезных дерматозах выявлено нарушение степени экспрессии кадгеринового комплекса вплоть до его исчезновения из нормальной локализации и появление извращенной его экспрессии в зоне базальной мембраны эпидермиса. Выявленные изменения экспрессии и локализации кадгеринов свидетельствуют о том, что под действием этиологических и патогенетических факторов происходит переключение функции одних генов на другие гены, т.е. при подавлении одних и активации других. Полученные сведения могут быть использованы в качестве дополнительных диагностических маркеров в дифференциальной диагностике аутоиммунных буллезных дерматозов.

1. Махнева Н.В., Белецкая Л.В. Способ диагностики аутоиммунных буллезных дерматозов: патент России № 2352947.2009. Бюл. № 11.

3. Mice lacking desmocollin 1 show epidermal fragility accompanied by barrier defects and abnormal differentia-

tion / M. Chidgey, C. Brakebusch, E. Gustafsson, A. Cruchley, C. Haill, S. Kirk, A. Mernitt, A. North, C. Tselepis, J. Hewitt //

4. Expression of cadherin cell adhesion molecules during human skin development: morphogenesis of epidermis, hair follicles and eccrine sweat ducts / M. Fujita, F. Furukawa, K. Fujii, Y. Horiguchi, M. Takeichi, S. Imamura // Arch. Dermatol. Res. – 1992. – Vol. 284, № 3. –

5. Getsios S., Huen A.C., Green K.L. Working out the strength and flexibility of desmosomes // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. – 2004. – Vol. 5, № 4. – P. 271–281.

6. Kottke M., Delva E., Kowalczyk A.P. The desmosome: cell science lessons from human diseases // J. Cell Sci. – 2006. – Vol. 119, Pt. 5. – P. 797–806

7. Immunohistochemical examination of P-cadherin in bullous and acantholytic skin diseases / A. Kovacs, E. Schmidt, A. Begany, J. Hunyadi, A. Szegedi // Acta Derm.Venereol. – 2004. – Vol. 84, № 2. – P. 116–119.

8. Postnatal lethality of P-cadherin/desmoglein3 double knockout mice: demonstration of a cooperative effect of theses cell adhesion molecule in tissue homeostasis of stratifird squamous epithelia / J.M. Lenox, P.J. Koch, M.G. Mahoney, M. Lieberman, J.R. Stanley, G.L. Radice // J. Invest. Dermatol. – 2000. – Vol. 114, № 5. – P. 948–952.

9. Nicolas J.F., Staquet M.J. Molecules de l’adherence cellulaire et pathologie cutanee //Ann. Dermatol. Venereol. – 1995. – Vol. 122, № 1–2. – P. 50–57.

10. Mutations in ATP2C1, encoding a Ca2+pump, cause Darier disease / A. Sakuntabhai, V. Ruiz-Perez, S. Carter, N. Jacobsen, S. Burge, S. Monk, M. Smith, C.S. Munro, M. O’Donovan et al. // Nat. Genet. – 1999. – Vol. 21, № 3. – P. 271–277.

Кадгерины представляют собой наиболее разнообразную группу кальций-зависимых гликозилированных протеинов. Они участвуют главным образом в межклеточных взаимодействиях, обеспечивающих адгезию между двумя идентичными молекулами, которые экспрессированы на поверхности двух клеток одного и того же типа [2, 5]. Цитоплазматический домен этих молекул играет важную роль в связи с протеинами цитоскелета, способствуя сохранению формы клеток [6]. Кроме физического контакта, который обеспечивают кадгерины между двумя клетками, они способствуют передаче ряда сигналов через структуры цитоскелета, контролируя рост и дифференцировку клеток [5]. В коже молекулы адгезии обеспечивают сложную организацию, вовлекая эпителий, дерму, сосуды, нервы, железы. И любые изменения, связанные с аномалией экспрессии или дисфункцией этих молекул, могут привести к серьезным деструктивным последствиям [2, 3, 9].

Целью исследования явилось определение степени экспрессии кадгеринового комплекса при аутоиммунных буллезных дерматозах и возможности использования полученных данных в качестве дополнительного диагностического маркера при данных заболеваниях.

Материал и методы исследования

Работа выполнена на основании клинического обследования и изучения биопсийного материала кожи больных аутоиммунными буллезными дерматозами.

Изучение степени экспрессии кадгеринового комплекса проведено непрямым методом иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител (МкАТ) мыши против кадгеринового комплекса, anti-pan cadherin (SIGMA, США) на 47 биоптатах клинически интактных участков кожи и биоптатах пораженных участков кожи 45 больных, из которых 23 больных аутоиммунной пузырчаткой (11 больных вульгарной пузырчаткой, 9 - себорейной пузырчаткой, один больной вегетирующей пузырчаткой, один - листовидной пузырчаткой, один - пранеопластической пузырчаткой), 16 больных буллезным пемфигоидом, 2 - линейным IgA-зависимым буллезным дерматозом, 4 - приобретенным буллезным эпидермолизом. В качестве контроля использовали криостатные срезы разных видов тканей. Срезы кожи практически здоровых лиц, больных, страдающих дилатационной кардиомиопатией, срезы почек человека и срезы сердца быка. При этом экспрессия кадгеринового комплекса была выявлена в межклеточных пространствах базального и шиповатого слоев эпидермиса (рисунок a), волосяного фолликула, в стенке артериол дермы, во вставочных пластинках кардиомиоцитов, в местах межклеточных контактов почечных канальцев и клубочков.

Под местной анестезией 2,0 %-м раствором новокаина проводилась биопсия кожи (из пораженных и клинически не пораженных участков) размером 0,5×0,5 см. Кусочки тканей замораживали при -20 °С. Серийные криостатные срезы толщиной 4-5 мкм готовили в микротом-криостате (-20 °С) и использовали в фиксированном виде (в 100 %-м холодном (4 °С) ацетоне в течение 10 мин). Затем срезы промывали физиологическим раствором с фосфатным буфером (PBS), pH 7,0-7,4, в течение 3-5 мин. При нанесении МкАТ на срезы препараты выдерживали в течение 18 ч при 4 °С во влажной камере. После промывки в течение 3-5 мин PBS (pH 7,0-7,4) срезы обрабатывали люминесцирующей сывороткой против иммуноглобулинов мыши ((НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Г.Гамалеи АМН РФ; ИМТЕК, Москва) в течение 50-60 мин во влажной камере в термостате при 37,0-37,2 °С, вновь промывали PBS 3-5 мин и заключали под покровное стекло в 60 %-й нейтральный глицерин. Исследовали препараты с помощью люминесцентного микроскопа LEITZ LABORLUX S (LEIKA). Препараты фотографировали на пленку РФ-3 с объективом х40 и окуляр-гомалем х3.

Часть срезов использовали в нефиксированном виде с целью обнаружения фиксированного иммуноглобулина в межклеточных пространствах и в зоне базальной мембраны эпидермиса при аутоиммунной пузырчатке и аутоиммунных буллезных дерматозах с поражением дермо-эпидермального соединения (буллезный пемфигоид, линейный IgA-зависимый буллезный дерматоз, приобретенный буллезный эпидермолиз) соответственно. Криостатные срезы, фиксированные 96° этанолом, окрашивали гематоксилином и эозином с целью морфологического контроля.

Результаты исследования и их обсуждение

При исследовании как клинически интактных, так и пораженных участков кожи 23 больных с различными формами пузырчатки выявлено нарушении экспрессии кадгеринового комплекса. Так, во всех исследованных 11 случаях вульгарной пузырчатки, наряду с участками нормальной экспрессии кадгеринов в межклеточных пространствах, выявлено их исчезновение из этой локализации или маскировка при одновременной экспрессии кадгерин-положительного материала в роговом слое и/или на поверхности кожи (рисунок б). Кроме того, в 5 случаях дополнительно обнаружена перицитоплазматическая или перинуклеарная экспрессия в отдельных клеточных элементах базального и шиповатого слоев с одновременной реакцией в зоне базальной мембраны эпидермиса. Подобную иммуногистохимичскую картину наблюдали в случаях вегетирующей (1) и паранеопластической (1) пузырчатки. Если в случае вегетирующей пузырчатки отмечена только перинуклеарная экспрессия кадгеринов в отдельных клеточных элементах, то в случае паранеопластической пузырчатки - дополнительно участками и в зоне базальной мембраны эпидермиса. Кроме того, в том и другом случаях отмечено скопление кадгерин-положительного материала в роговом слое и секвестрация его на поверхность кожи.

Интересно, что экспрессия кадгеринового комплекса при вульгарной пузырчатке отмечалась преимущественно (в 8 случаях из 11) в межклеточных пространствах базального и шиповатого слоев эпидермиса. При этом интенсивность свечения при иммуногистохимической реакции была различной, от выраженной экспрессии кадгеринового комплекса до полного ее отсутствия в местах начала формирования внутриэпидермального пузыря. В случаях образования внутриэпидермального надбазального пузыря обнаружено парадоксальное явление: усиление экспрессии кадгеринов в супрабазальных слоях, составляющих покрышку пузыря.

Во всех 9 исследованных случаях себорейной пузырчатки в клинически интактных участках, а также в очагах поражения кожи выявлена четкая картина нарушения экспрессии кадгеринов: от различной степени экспрессии их в межклеточных пространствах базального и шиповатого слоев до полного исчезновения со скоплением специфического материала в роговом слое и секвестрацией его на поверхность кожи. При этом в месте формирования внутриэпидермального пузыря, как и в случае вульгарной пузырчатки, отмечена выраженная экспрессия кадгеринов в супрабазальных слоях эпидермиса, составляющих его покрышку. Кроме того, в 5 случаях из 9 дополнительно обнаружена перинуклеарная экспрессия в отдельных клеточных элементах, а в 3 других случаях - в зоне базальной мембраны эпидермиса.

В местах формирования внутриэпидермальных пузырей отмечено поражение межклеточных соединений на более протяженных участках эпидермиса с участием всех его слоев и образованием как надбазальных (глубоких), так и поверхностных (на уровне зернистого слоя) внутриэпидермальных пузырей. Интересно, что у одного и того же больного можно наблюдать одновременно формирование пузырей на разных уровнях слоев эпидермиса. При этом усиление экспрессии кадгеринов выявлялось в цитоплазме кератиноцитов верхних слоев эпидермиса, а в некоторых случаях (3 случая) одновременно и участками в зоне базальной мембраны эпидермиса.

При одновременном исследовании клинически интактных и пораженных участков кожи двух больных себорейной пузырчаткой выявлена идентичная иммуноморфологическая картина - ослабление экспрессии кадгеринового комплекса на поверхности клеток базального и шиповатого слоев с перицитоплазматической или перинуклеарной экспрессией в отдельных клеточных элелементах и секвестрацией специфического материала на поверхность кожи. Причем в одном случае выявлена экспрессия в зоне базальной мембраны эпидермиса.

В случае листовидной пузырчатки отмечено исчезновение экспрессии молекул адгезии кадгеринов в широких зонах эпидермиса, несмотря на морфологическую патологию классической локализации поверхностного внутриэпидермального пузыря с выраженной экспрессией в нем кадгеринового комплекса.

При исследовании криостатных срезов кожи больных буллезным пемфигоидом во всех 16 исследованных случаях выявлено нарушение экспрессии кадгеринового комплекса. Так, в большинстве случаев (в 14 из 16) наряду с участками сохранения кадгеринов на поверхности клеток эпидермиса, выявлено исчезновение или маскировка молекул адгезии с проявлением их экспрессии в зоне базальной мембраны эпидермиса и перинуклеарной зоне отдельных клеточных элементов со скоплением кадгерин- положительного материала под роговым слоем и секвестрацией на поверхность кожи. Экспрессия кадгеринового комплекса в зоне базальной мембраны эпидермиса отмечена в 10 случаях из 14, а в месте образования подэпидермального пузыря также - на его покрышке и дне. При этом наиболее выраженная экспрессия наблюдалась на покрышке подэпидермального пузыря (рисунок в). В двух случаях буллезного пемфигоида экспрессии кадгеринового комплекса не было отмечено ни в одной из структур эпидермиса.

Экспрессия кадгеринового комплекса. Обработка моноклональными антителами
к pan-cadherin. Непрямой метод иммунофлюоресценции. х400:
a - криостатный срез практически здорового человека. Экспрессия кадгеринового комплекса в десмосомах межклеточных пространств (стрелка) эпидермиса; б - e: криостатные срезы клинически интактных участков кожи больных аутоиммунными буллезными дерматозами. Участки нормальной экспрессии кадгеринов перемежаются с участками подавления (стрелка) их экспрессии в десмосомах межклеточных пространств при аутоиммунной пузырчатке (b); в - буллезный пемфигоид. Выраженная экспрессия кадгеринов на покрышке (стрелка) подэпидермального пузыря; г - линейный IgA-зависимый буллезный дерматоз. Реакция в зоне базальной мембраны эпидермиса (стрелка) с секвестрацией специфического материала
на поверхность кожи; д - приобретенный буллезный эпидермолиз. Выраженная реакция
на дермальной части (стрелка) подэпидермального пузыря

В двух исследованных случаях линейного IgA-зависимого буллезного дерматоза отмечена перинуклеарная экспрессия молекул адгезии в некоторых кератиноцитах и в зоне базальной мембраны эпидермиса с секвестрацией кадгерин-положительного материала на поверхность кожи (рисунок г). Подобную иммуногистохимическую картину наблюдали и в 4 исследованных случаях приобретенного буллезного эпидермолиза. При этом в месте расслоения дермо-эпидермального соединения экспрессия молекул адгезии выявлена как на эпидермальной, так и на дермальной частях. Наиболее выраженная иммуногистохимическая реакция отмечена на дне подэпидермального пузыря (рисунок д).

Заключение

При различных аутоиммунных буллезных дерматозах (аутоиммунная пузырчатка, буллезный пемфигоид, линейный IgA-зависимый буллезный дерматоз, приобретенный буллезный эпидермолиз) происходит нарушение экспрессии белков кадгеринового комплекса вплоть до его исчезновения и проявления в тех структурах эпидермиса, где в норме он отсутствует [1]. Отсутствие экспрессии кадгеринового комплекса в межклеточных пространствах эпидермиса свидетельствует о вовлечении его в иммунопатологический процесс при аутоиммунных буллезных дерматозах. При этом кадгериновый комплекс при аутоиммунной пузырчатке является непосредственно антигеном-мишенью для аутоантител. При аутоиммунных буллезных дерматозах с поражением дермо-эпидермального соединения кадгерины вовлекаются опосредованно с одновременной извращенной их экспрессией в зоне базальной мембраны эпидермиса. Последнее явление было выявлено в большинстве случаев (72,7 %) аутоиммунных буллезных дерматозов с поражением дермо-эпидермального соединения и в ряде случаев (26,1 %) различных форм аутоиммунной пузырчатки, включая паранеопластический генез. Следует отметить, что при буллезном пемфигоиде и приобретенном буллезном эпидермолизе в месте образования подэпидермального пузыря экспрессия кадгеринового комплекса выявлена как на покрышке пузыря, так и на его дне. Однако выраженная иммуногистохимическая реакция наблюдалась в месте локализации антигена-мишени. Вероятно, под действием патогенетических факторов происходит переключение экспрессии генов одних клеток на гены других (при подавлении одних и активации других). Кроме того, при аутоиммунной пузырчатке вопреки логическому мышлению обнаружено парадоксальное явление усиления экспрессии кадгеринового комплекса в местах формирования внутриэпидермального пузыря. Возможно, это связано с компенсаторным эффектом этих функционально близких молекул адгезии, т.е. исчезновение одних молекул и появление других [8]. Подобное явление наблюдали и другие авторы при различных буллезных дерматозах [7]. Для объяснения такого необычного явления выдвигают несколько гипотез. Одна из них заключается в ассоциации синтеза кадгеринов с нарушенной пролиферацией и дифференцировкой клеток [4, 7], другая - с нарушением концентрации кальция в кератиноцитах или мутацией генов, кодирующих кальциевые насосы, ответственные за акантолиз [7, 10].

Под влиянием различных факторов, в том числе аутоантител, происходит диссоциация интра- и экстрацеллюлярных доменов кадгеринов. При этом экстрацеллюлярные домены кадгеринов отрываются от поверхности клеток в ходе акантолиза, но цитоплазматический домен остается на мембране, сохраняя связь с цитоскелетом, скрепляемый катенином. В ходе иммуногистохимических исследований этот цитоплазматический/внутриклеточный домен кадгерина является вполне достаточным для связывания антител, результатом чего оказываются положительные реакции в нетипичной локализации.

Таким образом, данное исследование позволило установить не только вовлечение кадгеринового комплекса в иммунопатологический процесс при аутоиммунных буллезных дерматозах, но и выявить особенности его экспрессии при данных заболеваниях. Последнее можно использовать в качестве дополнительного диагностического маркера для дифференциальной диагностики аутоиммунных буллезных дерматозов, в частности буллезного пемфигоида и приобретенного буллезного эпидермолиза. Такая диагностика аутоиммунных буллезных дерматозов в ранние сроки заболевания позволяет провести адекватную терапию с уменьшением риска продолжения углубления патологического процесса у больных, страдающих аутоиммунным буллезным дерматозом.

Рецензенты:

Сускова В.С., д.м.н., профессор, зав. лабораторией иммунодиагностики и иммунокоррекции ФГУ «ФНЦТИО им. академика В.И. Шумакова» Минздравсоцразвития России, г. Москва;

Снарская Е.С., д.м.н., профессор кафедры кожных и венерических болезней факультета послевузовского профессионального образования врачей ГОУ ВПО «Первый московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздравсоцразвития РФ, г. Москва.

Читайте также: